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southern雜交指的是什么？ 瓊脂糖凝膠電泳分離待測(cè)DNA樣品基本原理是什么？|天天熱訊

來(lái)源：今日熱點(diǎn) 時(shí)間：2023-06-25 13:45:34

southern雜交指的是什么？

Southern印跡雜交（Southern blot）是1975年由英國(guó)人southern創(chuàng)建，是研究DNA圖譜的基本技術(shù)，在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價(jià)值。由于核酸分子的高度特異性及檢測(cè)方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進(jìn)一步構(gòu)建出DNA分子的遺傳圖，或進(jìn)行目的基因序列的測(cè)定以滿足基因克隆的特殊要求，還必須掌握DNA分子中基因編碼區(qū)的大小和位置。有關(guān)這類數(shù)據(jù)資料可應(yīng)用Southern印跡雜交技術(shù)獲得。

瓊脂糖凝膠電泳分離待測(cè)DNA樣品基本原理是什么？

Southern印跡雜交是先將DNA樣品（含不同大小的DNA片段）先按片段長(zhǎng)短進(jìn)行分離，然后進(jìn)行雜交。這樣可確定雜交靶分子的大小。因此，制備DNA樣品后需要進(jìn)行電泳分離。在恒定電壓下，將DNA樣品放在0.8～1.0%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，標(biāo)準(zhǔn)的瓊脂糖凝膠電泳可分辨70－80000bp的DNA片段，故可對(duì)DNA片段進(jìn)行分離。但需要用不同的膠濃度來(lái)分辨這個(gè)范圍內(nèi)的不同的DNA片段。原則是分辨大片段的DNA需要用濃度較低的膠，分辨小片段的DNA則需要濃度較高的膠。經(jīng)過一段時(shí)間電泳后，DNA按分子量大小在凝膠中形成許多條帶，大小相同的分子處于同一條帶位置。另外為了便于測(cè)定待測(cè)DNA分子量的大小或是所處的分子大小范圍，往往同時(shí)在樣品鄰近的泳道中加入已知分子量的DNA樣品即標(biāo)準(zhǔn)分子量DNA （DNA marker）進(jìn)行電泳。DNA marker可以用放射性核素進(jìn)行末端標(biāo)記，通過這種方式，雜交后的標(biāo)準(zhǔn)分子量DNA也能顯影出條帶。

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